Један свет једна борба
─Међународна сарадња за изградњу глобалне заједнице заједничке судбине која одговара на изазове пандемије ЦОВИД-19
Нови корона вирус који је захватио свет довео је до текуће глобалне кризе пандемије ЦОВИД-19.Нови корона вирус нема границе, ниједна земља неће бити поштеђена ове битке против ЦОВИД-19.Као одговор на ову светску пандемију ЦОВИД-19, Лиминг Био-Продуцтс Цорп даје допринос да подржи добробит наших глобалних заједница.
Наш свет је тренутно суочен са невиђеним утицајем пандемије нове болести корона вируса 2019 (ЦОВИД-19).До данас не постоји ефикасан лек за лечење ове болести.Међутим, развијени су многи дијагностички тестови за откривање ЦОВИД-19.Ови тестови су засновани на молекуларним или серолошким методама за откривање нових биомаркера нуклеинске киселине или антитела специфичне за коронавирус.Пошто је ЦОВИД-19 достигао статус пандемије, рана дијагноза нове инфекције коронавирусом је кључна за процену ширења вируса и његово сузбијање, али савршен тест за универзалну употребу још не постоји.Морамо да знамо који тестови би се потенцијално могли користити за скрининг, дијагнозу и праћење инфекције ЦОВИД-19 и која су њихова ограничења.Веома је важно како боље искористити ове научне алате и помоћи да се идентификује и контролише настанак ове озбиљне болести која се брзо шири.
Сврха откривања новог корона вируса је да се утврди да ли је особа која има инфекцију ЦОВИД-19 или асимптотични носилац који може тихо ширити вирус, како би се пружиле битне информације за усмеравање доношења одлука о клиничком лечењу.Претходне студије су показале да 70% клиничких одлука зависи од резултата тестирања.Када се користе различите методе детекције, захтеви комплета реагенаса за детекцију су такође различити.
Слика 1
Слика 1:Дијаграм који приказује кључне фазе општег нивоа биомаркера током типичног временског тока инфекције ЦОВИД-19.Кс-оса означава број дана инфекције, а И-оса показује вирусно оптерећење, концентрацију антигена и концентрацију антитела у различитим периодима.Антитело се односи на ИгМ и ИгГ антитела.И РТ-ПЦР и детекција антигена се користе за откривање присуства или одсуства новог коронавируса, што је директан доказ за рано откривање пацијената.У року од недељу дана од вирусне инфекције, ПЦР детекција или детекција антигена је пожељна.Након инфекције новим коронавирусом у трајању од око 7 дана, ИгМ антитело против новог коронавируса постепено се повећава у крви пацијента, али трајање постојања је кратко, а његова концентрација брзо опада.Насупрот томе, ИгГ антитело против вируса се појављује касније, обично око 14 дана након инфекције вирусом.Концентрација ИгГ се постепено повећава и дуго се задржава у крви.Дакле, ако се ИгМ открије у крви пацијента, то значи да је вирус недавно заражен, што је рани маркер инфекције.Када се у крви пацијента открије ИгГ антитело, то значи да је вирусна инфекција већ неко време.Такође се назива касна инфекција или претходна инфекција.Често се примећује код пацијената који су у фази опоравка.
Биомаркери новог коронавируса
Нови коронавирус је РНК вирус, који се састоји од протеина и нуклеинских киселина.Вирус напада (људско) тело домаћина, улази у ћелије преко места везивања одговарајућег рецептора АЦЕ2 и реплицира се у ћелијама домаћина, узрокујући да људски имуни систем реагује на стране нападаче и производи специфична антитела.Стога, нуклеинске киселине и антигени у бочици и специфична антитела против новог коронавируса теоретски могу да се користе као специфични биомаркери за детекцију новог коронавируса.За детекцију нуклеинске киселине најчешће се користи РТ-ПЦР технологија, док се серолошке методе обично користе за детекцију нових антитела специфичних за коронавирус.Тренутно су доступне различите методе тестирања које можемо изабрати за тестирање инфекције ЦОВИД-19 [1].
Основни принципи главних метода тестирања на нови коронавирус
До сада су доступни многи дијагностички тестови за ЦОВИД_19, а сваки дан све више тестних комплета добија одобрење за употребу у хитним случајевима.Иако нови развоји тестова излазе са толико различитих имена и формата, сви тренутни тестови ЦОВИД_19 у основи се ослањају на две главне технологије: детекцију нуклеинске киселине за вирусну РНК и серолошке имунотестове који откривају антитела специфична за вирус (ИгМ и ИгГ).
01. Детекција нуклеинске киселине
Ланчана реакција реверзне транскрипције-полимеразе (РТ-ПЦР), изотермна амплификација посредована петљом (ЛАМП) и секвенцирање следеће генерације (НГС) су уобичајене методе нуклеинских киселина за детекцију нове РНК коронавируса.РТ-ПЦР је први тип теста за ЦОВИД-19, који препоручују и Светска здравствена организација (СЗО) и амерички центар за контролу и превенцију болести (ЦДЦ).
02.Серолошка детекција антитела
Антитело је заштитни протеин који се производи у људском телу као одговор на инфекцију вирусом.ИгМ је рани тип антитела, док је ИгГ антитело каснијег типа.Узорак серума или плазме се обично испитује на присуство специфичних ИгМ и ИгГ типова антитела за процену акутне и реконвалесцентне фазе инфекције ЦОВИД-19.Ове методе детекције засноване на антителима укључују имунохроматографију колоидног злата, имунохроматографију са латексом или флуоресцентном микросфером, ензимски имуносорбентни тест (ЕЛИСА) и хемилуминисценцијски тест.
03. Детекција вирусног антигена
Антиген је структура на вирусу коју препознаје људско тело и која покреће имуни одбрамбени систем да производи антитела за уклањање вируса из крви и ткива.Вирусни антиген присутан на вирусу може се циљати и открити коришћењем имунотеста.Попут вирусне РНК, вирусни антигени су такође присутни у респираторном тракту инфицираних особа и могу се користити за дијагнозу акутне фазе инфекције ЦОВИД-19.Због тога се често препоручује сакупљање узорака из горњих дисајних путева као што су пљувачка, брисеви назофаринкса и орофарингеала, испљувак дубоког кашља, течност бронхоалвеоларног испирања (БАЛФ) за почетно тестирање на антиген.
Избор метода тестирања на нови корона вирус
Одабир методе тестирања укључује много фактора, укључујући клиничко окружење, контролу квалитета тестирања, време трајања, трошкове тестирања, методе прикупљања узорака, техничке захтеве лабораторијског особља, потребе за објектима и опремом.Детекција нуклеинских киселина или вирусних антигена треба да пружи директан доказ о присуству вируса и потврди дијагнозу нове инфекције вирусом корона.Иако постоји много метода за детекцију антигена, њихова осетљивост на детекцију новог коронавируса је теоретски нижа од оне код РТ-ПЦР амплификације.Тестирање на антитела је откривање анти-вирусних антитела произведених у људском телу, која касне у времену и често се не могу користити за рано откривање током акутне фазе вирусне инфекције.Клиничка поставка за апликације за откривање може да варира, а места за прикупљање узорака такође могу бити различита.За детекцију вирусних нуклеинских киселина и антигена, узорак се мора узети у респираторном тракту где је вирус присутан, као што су брисеви назофаринкса, орофарингеални брисеви, спутум или течност за бронхоалвеоларно испирање (БАЛФ).За детекцију на бази антитела, узорак крви треба да се прикупи и испита на присуство специфичног анти-вирусног антитела (ИгМ/ИгГ).Међутим, резултати теста на антитела и нуклеинске киселине могу се међусобно допуњавати.На пример, када је резултат тестирања негативан на нуклеинску киселину, негативан ИгМ, али ИгГ-позитиван, ови резултати указују на то да пацијент тренутно не носи вирус, али да је опорављен од нове инфекције коронавирусом.[2]
Предности и мане нових тестова на коронавирус
У Протоколу за дијагностику и лечење нове пнеумоније од коронавируса (пробна верзија 7) (објавила Национална здравствена комисија и Државна управа за традиционалну кинеску медицину 3. марта 2020.), тестирање нуклеинске киселине се користи као златни стандард за дијагнозу новог. инфекције коронавирусом, док се тестирање на антитела такође сматра једним од метода потврде дијагнозе.
Патогени и серолошки налази
(1) Патогени налази: Нова нуклеинска киселина коронавируса може се открити у брисевима назофаринкса, спутуму, секретима доњих дисајних путева, крви, фецесу и другим узорцима коришћењем РТ-ПЦРанд/или НГС метода.Тачније је ако се узорци узимају из доњих дисајних путева (спутум или екстракција ваздушних путева).Узорке треба доставити на испитивање што је пре могуће након сакупљања.
(2) Серолошки налази: ИгМ специфичан за НЦП вирус се може открити око 3-5 дана након почетка;ИгГ достиже титрацију од најмање 4 пута повећања током реконвалесценције у поређењу са акутном фазом.
Међутим, избор метода тестирања зависи од географске локације, медицинских прописа и клиничких услова.У САД, НИХ је издао Смернице за лечење корона вирусне болести 2019 (ЦОВИД-19) (сајт ажуриран: 21. априла 2020.), а ФДА је издала Политику за дијагностичке тестове за болест корона вируса-2019 током ванредне ситуације у области јавног здравља (објављена 16. марта 2020.). ), у којем је серолошко тестирање ИгМ/ИгГ антитела одабрано само као скрининг тест.
Метода детекције нуклеинске киселине
РТ_ПЦР је високо осетљив тест нуклеинске киселине дизајниран да открије да ли је нова РНК коронавируса присутна у респираторном или другом узорку.Позитиван резултат ПЦР теста значи присуство нове РНК коронавируса у узорку за потврду инфекције ЦОВИД-19.Негативан резултат ПЦР теста не значи одсуство вирусне инфекције јер на то може утицати лош квалитет узорка или временска тачка болести у фази опоравка, итд.Иако је РТ-ПЦР веома осетљив тест, он има неколико недостатака.РТ-ПЦР тестови могу бити радно интензивни и дуготрајни, што у великој мери зависи од високог квалитета узорка.Ово може бити изазов јер количина вирусне РНК не само да се значајно разликује између различитих пацијената, већ може да варира и унутар истог пацијента у зависности од временских тачака када се узорак прикупља, као и фаза инфекције или појаве клиничких симптома.За откривање новог коронавируса потребни су висококвалитетни узорци који садрже довољну количину нетакнуте вирусне РНК.
РТ-ПЦР тест може дати нетачан негативан резултат (лажно негативан) за неке пацијенте који имају инфекцију ЦОВИД-19.Као што знамо, главна места инфекције новог коронавируса налазе се у плућима и доњим респираторним путевима, попут алвеола и бронхија.Због тога се сматра да узорак спутума из дубоког кашља или течности бронхоалвеоларне лаваже (БАЛФ) има највећу осетљивост за откривање вируса.Међутим, у клиничкој пракси, узорци се често узимају из горњих дисајних путева коришћењем назофарингеалних или орофарингеалних брисева.Сакупљање ових узорака није само непријатно за пацијенте, већ захтева и посебно обучено особље.Да би узимање узорака било мање инвазивно или лакше, у неким случајевима се пацијентима може дати орални брис и дозволити им да сами узму узорак из букалне слузокоже или брис језика.Без довољно вирусне РНК, РТ-кПЦР може дати лажно негативан резултат теста.У провинцији Хубеи, Кина, РТ-ПЦР осетљивост у почетној детекцији пријављена је само око 30% -50%, са просеком од 40%.Висока стопа лажно негативних је највероватније узрокована недовољним узорковањем.
Поред тога, РТ-ПЦР тест захтева високо обучено особље да изврши сложене кораке екстракције РНК и процедуру ПЦР амплификације.Такође захтева виши ниво заштите биолошке безбедности, посебан лабораторијски објекат и ПЦР инструмент у реалном времену.У Кини, РТ-ПЦР тест за откривање ЦОВИД-19 треба да се изведе у лабораторијама нивоа 2 биолошке безбедности (БСЛ-2), уз заштиту особља користећи праксу нивоа биолошке безбедности 3 (БСЛ-3).Према овим захтевима, од почетка јануара до почетка фебруара 2020, капацитет лабораторије ЦДЦ у Кини Вухан био је у стању да открије само неколико стотина случајева дневно.Обично то не би представљало проблем када се тестирају друге заразне болести.Међутим, када се суочавамо са глобалном пандемијом као што је ЦОВИД-19 са потенцијално милионима људи које треба тестирати, РТ-ПЦР постаје критично питање због својих захтева за посебним лабораторијским објектима или техничком опремом.Ови недостаци могу ограничити РТ-ПЦР да се користи као ефикасан алат за скрининг, а такође могу довести до кашњења у извештајима о резултатима тестирања.
Серолошка метода детекције антитела
Са напредовањем тока болести, посебно у средњим и касним стадијумима, стопа детекције антитела је веома висока.Студија у Централној јужној болници Вухан показала је да би стопа откривања антитела могла да достигне више од 90% у трећој недељи инфекције ЦОВИД-19.Такође, антитело је производ имуног одговора човека на нови коронавирус.Тест на антитела нуди неколико предности у односу на РТ-ПЦР.Прво, серолошки тестови на антитела су једноставни и брзи.Тестови бочног протока антитела могу да се користе за пружање резултата за 15 минута.Друго, циљ детектован серолошким тестом је антитело, за које се зна да је много стабилније од вирусне РНК.Током сакупљања, транспорта, складиштења и тестирања, узорци за тестове на антитела су генерално стабилнији од узорака за РТ-ПЦР.Треће, пошто је антитело равномерно распоређено у циркулацији крви, мање су варијације узорковања у поређењу са тестом нуклеинске киселине.Запремина узорка потребна за тест на антитела је релативно мала.На пример, 10 микролитара крви из убода прста је довољно за употребу у тесту бочног протока антитела.
Уопштено говорећи, тест на антитела је изабран као додатак за детекцију нуклеинске киселине да би се побољшала стопа откривања новог коронавируса током токова болести.Када се тест на антитела користи заједно са тестом нуклеинске киселине, може повећати тачност теста за дијагнозу ЦОВИД-19 смањењем потенцијалних лажно позитивних и лажно негативних резултата.Тренутни водич за употребу не препоручује коришћење две врсте теста одвојено као независног формата за детекцију, већ би требало да се користи као комбиновани формат.[2]
Слика 2:Тачна интерпретација резултата теста нуклеинске киселине и антитела за откривање нове инфекције коронавирусом
Слика 3:Лиминг Био-Продуцтс Цо., Лтд. – Комплет за двоструко брзо тестирање ИгМ/ИгГ антитела на нови коронавирус (СтронгСтеп®Брзи тест на САРС-ЦоВ-2 ИгМ/ИгГ антитела, латекс имунохроматографија)
Слика 4:Лиминг Био-Продуцтс Цо., Лтд. – СтронгСтеп®Нови Цоронавирус (САРС-ЦоВ-2) Мултиплек ПЦР комплет у реалном времену (детекција за три гена, метода флуоресцентне сонде).
Белешка:Овај високо осетљив ПЦР комплет спреман за употребу доступан је у лиофилизованом формату (процес сушења замрзавањем) за дуготрајно складиштење.Комплет се може транспортовати и чувати на собној температури и стабилан је годину дана.Свака епрувета премикса садржи све реагенсе потребне за ПЦР амплификацију, укључујући реверзну транскриптазу, Так полимеразу, прајмере, сонде и дНТПс супстрате. Корисници могу једноставно да реконституишу мешавину додавањем воде за ПЦР заједно са шаблоном и затим учитавају на ПЦР инструмент за покретање амплификације.
Као одговор на избијање новог коронавируса, Лиминг Био-Продуцтс Цо., Лтд. је брзо радио на развоју два дијагностичка комплета како би омогућили клиничким и јавноздравственим лабораторијама да брзо дијагностикују инфекцију ЦОВИД-19.Ови комплети су веома погодни за употребу за велике скрининге у земљама и регионима у којима се епидемија новог коронавируса брзо шири, као и за постављање дијагнозе и потврде инфекције ЦОВИД-19.Ови комплети су за употребу само под претходно обавештеним одобрењем за хитну употребу (ПЕУА).Тестирање је ограничено на лабораторије сертификоване према прописима националних или локалних власти.
Метода детекције антигена
1. Детекција вирусног антигена је класификована у исту категорију директне детекције као и детекција нуклеинске киселине.Ове методе директне детекције траже доказе о вирусним патогенима у узорку и могу се користити за потврду дијагнозе.Међутим, развој комплета за детекцију антигена захтева висок квалитет моноклонских антитела са јаким афинитетом и високом осетљивошћу способних да препознају и ухвате патогене вирусе.Обично је потребно више од шест месеци да се изабере и оптимизује моноклонско антитело погодно за употребу у припреми комплета за детекцију антигена.
2. Тренутно су реагенси за директно откривање новог корона вируса још увек у фази истраживања и развоја.Стога, ниједан комплет за детекцију антигена није клинички валидиран и комерцијално доступан.Иако је раније објављено да је дијагностичка фирма у Шенжену развила комплет за детекцију антигена и клинички тестирана у Шпанији, поузданост и тачност теста нису могли бити потврђени због присуства проблема са квалитетом реагенса.До данас, НМПА (бивша кинеска ФДА) још није одобрила ниједан комплет за детекцију антигена за клиничку употребу.У закључку, развијене су различите методе детекције.Свака метода има своје предности и ограничења.Резултати различитих метода могу се користити за верификацију и допуну.
3. Производња квалитетног комплета за тестирање на ЦОВИД-19 снажно зависи од оптимизације током истраживања и развоја.Лиминг Био-Продуцт Цо., Лтд.тест сетови су потребни да испуне строге стандарде производње и контроле квалитета како би се осигурало да обезбеђују највиши ниво перформанси и доследности.Научници у Лиминг Био-Продуцт Цо., Лтд. имају преко двадесет година искуства у дизајнирању, тестирању и оптимизацији ин витро дијагностичких комплета како би се обезбедио највиши ниво перформанси у аналитичкој квантификацији.
Током пандемије ЦОВИД-19, кинеска влада се суочила са порастом огромне потражње за материјалима за превенцију епидемије на међународним жариштима.Дана 5. априла, на конференцији за штампу Заједничког механизма за превенцију и контролу Државног савета „Јачање управљања квалитетом медицинских материјала и регулисање поретка на тржишту“, Јианг Фан, инспектор првог нивоа Одељења за спољну трговину Министарства Цоммерце, рекао је: „Даље, фокусираћемо наше напоре на два аспекта, прво, да убрзамо подршку већем броју медицинских залиха потребних међународној заједници, као и да побољшамо контролу квалитета, регулацију и управљање производима. Даћемо допринос Кине заједничком одговору на глобалну епидемију и изградњи заједнице са заједничком будућношћу за човечанство.
Слика 5:Нови реагенс за коронавирус компаније Лиминг Био-Продуцтс Цо., Лтд. добио је сертификат о регистрацији ЕУ ЦЕ
Почасно признање
Хоусхенсхан
Слика 6. Лиминг Био-Продуцтс Цо., Лтд. подржала је планинску болницу Вухан (ХоуСхенСхан) у борби против епидемије ЦОВИД-19 и добила је почасну потврду Црвеног крста Вухана.Планинска болница Вухан Вулкан је најпознатија болница у Кини која је специјализована за лечење тешких пацијената са ЦОВИД-19.
Како се нова епидемија корона вируса наставља ширити широм света, Нањинг Лиминг Био-Продуцтс Цо., Лтд. појачава подршку и помаже заједницама широм света помоћу наших иновативних технологија у борби против ове глобалне претње без преседана.Брзо тестирање на инфекцију ЦОВИД-19 је кључни део решавања ове претње.Настављамо да доприносимо на значајан начин тако што пружамо висококвалитетне дијагностичке платформе у руке здравствених радника на првој линији како би људи могли да добију критичне резултате тестирања који су им потребни.Напори Лиминг Био-продуцтс Цо., Лтд. у борби против пандемије ЦОВИД-19 су да својим технологијама, искуствима и стручности допринесемо међународним заједницама за изградњу глобалне заједнице судбине.
Дуго притисните ~Скенирај и пратите нас
Емаил: sales@limingbio.com
Веб-сајт: хттпс://лимингбио.цом
Време објаве: 01.05.2020
